附件6：

體外診斷試劑分析性能評估（準(zhǔn)確度-回收實(shí)驗(yàn)）

技術(shù)審查指導(dǎo)原則

    一、前言

準(zhǔn)確度評估資料是評價(jià)擬上市產(chǎn)品有效性的重要依據(jù)，也是產(chǎn)品注冊所需的重要申報(bào)資料之一。定量檢測方法的回收實(shí)驗(yàn)是評估準(zhǔn)確度的方法之一，用于評估定量檢測方法準(zhǔn)確測定待測分析物的能力，結(jié)果用回收率表示。

本指導(dǎo)原則基于國家食品藥品監(jiān)督管理局《體外診斷試劑注冊管理辦法（試行）》的有關(guān)要求，參考有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，對采用回收實(shí)驗(yàn)進(jìn)行準(zhǔn)確度評估的實(shí)驗(yàn)方法和數(shù)據(jù)處理方法進(jìn)行了原則性要求。其目的是為生產(chǎn)企業(yè)采用回收實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行準(zhǔn)確度評估并準(zhǔn)備準(zhǔn)確度評估資料提供原則性指導(dǎo)，也為注冊管理部門審核該部分分析性能評估資料提供技術(shù)參考。

由于體外診斷試劑產(chǎn)品發(fā)展速度快、專業(yè)跨度大，國家食品藥品監(jiān)督管理局將根據(jù)體外診斷試劑發(fā)展的需要，適時(shí)對本指導(dǎo)原則進(jìn)行修訂。

二、適用范圍

    本指導(dǎo)原則適用于首次申請注冊、申請?jiān)S可事項(xiàng)變更的用于定量檢測的體外診斷產(chǎn)品。因體外診斷產(chǎn)品評價(jià)是將儀器、試劑、質(zhì)控品、校準(zhǔn)品等作為一個(gè)系統(tǒng)進(jìn)行評價(jià)，因此回收實(shí)驗(yàn)的評價(jià)采用系統(tǒng)的概念進(jìn)行描述。如特殊產(chǎn)品不適用于本指導(dǎo)原則，可進(jìn)行詳細(xì)說明并采用適當(dāng)?shù)姆椒ㄟM(jìn)行準(zhǔn)確度評價(jià)。

三、基本要求

（一）回收實(shí)驗(yàn)的基本要求

1.操作者應(yīng)熟悉待評價(jià)系統(tǒng)的操作。

  2.編寫系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，其中包括校準(zhǔn)程序和室內(nèi)質(zhì)控程序，采用合適的校準(zhǔn)品、質(zhì)控品并保持系統(tǒng)處于正常狀態(tài)。

   3.待評價(jià)系統(tǒng)的處理。進(jìn)行回收實(shí)驗(yàn)前，應(yīng)該對待評價(jià)系統(tǒng)進(jìn)行初步評價(jià)，并且對待評價(jià)系統(tǒng)進(jìn)行精密度及線性評價(jià)（參考相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)），只有在以上評價(jià)完成并且符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)要求后，才可進(jìn)行回收實(shí)驗(yàn)。

   （二）回收實(shí)驗(yàn)的評估及數(shù)據(jù)處理方法

1.實(shí)驗(yàn)樣本的基本要求和制備方法

（1）選擇合適濃度的常規(guī)檢測樣本，分為體積相同的3-4份。

  （2）在其中2-3份樣本中加入不同濃度相同體積的待測物標(biāo)準(zhǔn)液制備待回收分析樣本，加入體積小于原體積的10%，制成2-3個(gè)不同加入濃度的待回收分析樣本，計(jì)算加入的待測物的濃度。

  （3）在另一份樣本中加入同樣體積的無待測物的溶劑，制成基礎(chǔ)樣本。

    2.實(shí)驗(yàn)過程

用待評價(jià)系統(tǒng)對待回收分析樣本和基礎(chǔ)樣本進(jìn)行測定，通常對樣本進(jìn)行3次重復(fù)測定，計(jì)算均值，取其均值進(jìn)行下述計(jì)算。

3.數(shù)據(jù)處理及結(jié)果報(bào)告

（1）加入濃度n=標(biāo)準(zhǔn)液濃度n×[標(biāo)準(zhǔn)液加入體積/(樣本體積+標(biāo)準(zhǔn)液體積)]

  （2）計(jì)算回收率：

回收率n = 

  （3）計(jì)算平均回收率：

平均回收率 =

  （4）計(jì)算每個(gè)樣本回收率與平均回收率的差值：

每個(gè)樣本回收率與平均回收率的差值＝回收率n－平均回收率

    如差值超過±10%，應(yīng)查找原因并糾正，重新進(jìn)行評估。

  （5）計(jì)算比例系統(tǒng)誤差：

比例系統(tǒng)誤差 = |100% - 平均回收率|

  （6）結(jié)果評估：

    結(jié)果至少應(yīng)滿足相關(guān)國際及國家標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)滿足臨床需求。

4.范例——某法測定血清葡萄糖回收率

（1）樣本制備：

①基礎(chǔ)樣本血清：血清1ml（葡萄糖濃度5.5mmol/L）+蒸餾水0.1ml;

基礎(chǔ)樣本濃度＝5.5/(1+0.1)=5 mmol/L

②回收樣本1:血清1ml+0.1ml葡萄糖水溶液（濃度22mmol/L）; 

③回收樣本2：血清1ml+0.1ml葡萄糖水溶液（濃度55mmol/L）。

（2）計(jì)算加入濃度：

加入濃度1＝22×[0.1/(0.1＋1.0)]＝2mmol/L

    加入濃度2＝55×[0.1/(0.1＋1.0)]＝5mmol/L

（3）采用待評價(jià)系統(tǒng)，按照從低到高的濃度順序，每個(gè)樣本測定3次，取平均值，填入表1。

表1

回收濃度1＝7.06-5＝2.06mmol/L

    回收濃度2＝9.95-5＝4.95mmol/L

    回收率1＝＝103％

    回收率2＝＝99％

     （4）計(jì)算平均回收率：平均回收率 =  = 101%。

（5）計(jì)算每個(gè)樣本回收率與平均回收率的差值：

    分析樣本1:103％－101％＝2％

    分析樣本2：99％－101％＝－2％

    兩個(gè)樣本回收率與平均回收率的差值小于±10%，

（6）計(jì)算比例系統(tǒng)誤差：

     比例系統(tǒng)誤差 = |100% - 101%| = 1%

（7）結(jié)果評估：1% （CLIA 88）, 該方法的回收實(shí)驗(yàn)（準(zhǔn)確度）可接受。

    四、其他應(yīng)注意的問題：

（一）加入體積：加入的待測物標(biāo)準(zhǔn)液體積一般在樣本體積的10%以內(nèi)，如果高濃度的待測物標(biāo)準(zhǔn)液不易得到, 加入體積亦不得超過原樣本體積的20%。

加入的待測物標(biāo)準(zhǔn)液體積量不應(yīng)影響樣本基質(zhì)；并且保證在加樣過程中的取樣準(zhǔn)確度。

（二）加入的溶劑應(yīng)不影響對待測物的測定。

（三）加入待測物標(biāo)準(zhǔn)液的濃度：保證總濃度在系統(tǒng)分析測量范圍內(nèi)，盡量使加入標(biāo)準(zhǔn)液后樣本中的被測物濃度達(dá)到醫(yī)學(xué)決定水平。

（四）待測物標(biāo)準(zhǔn)液濃度：因?yàn)榇郎y物標(biāo)準(zhǔn)液溶液加入體積不到10%，為保證得到不同濃度的待回收分析樣本，標(biāo)準(zhǔn)液的濃度應(yīng)該足夠高。

    五、名詞解釋

（一）待評價(jià)系統(tǒng)：擬進(jìn)行性能評估的產(chǎn)品。

（二）待測物標(biāo)準(zhǔn)液:待測物與相應(yīng)的溶劑混合后制備的標(biāo)準(zhǔn)液。

（三）基礎(chǔ)樣本：樣本與相應(yīng)的溶劑混合制備成基礎(chǔ)樣本。

（四）待回收分析樣本：樣本與相應(yīng)的待測物標(biāo)準(zhǔn)液混合制備成待回收分析樣本。

    六、參考文獻(xiàn)

《臨床實(shí)驗(yàn)室管理學(xué)》，申子瑜等，人民衛(wèi)生出版社