一、概述

非臨床藥代動力學(xué)研究是通過動物體內(nèi)、外和人體外的研究方法，揭示藥物在體內(nèi)的動態(tài)變化規(guī)律，獲得藥物的基本藥代動力學(xué)參數(shù)，闡明藥物的吸收、分布、代謝和排泄的過程和特點。

非臨床藥代動力學(xué)研究在新藥研究開發(fā)的評價過程中起著重要作用。在藥效學(xué)和毒理學(xué)評價中，藥物或活性代謝物濃度數(shù)據(jù)及其相關(guān)藥代動力學(xué)參數(shù)是產(chǎn)生、決定或闡明藥效或毒性大小的基礎(chǔ)，可提供藥物對靶器官效應(yīng)（藥效或毒性）的依據(jù)；在藥物制劑學(xué)研究中，非臨床藥代動力學(xué)研究結(jié)果是評價藥物制劑特性和質(zhì)量的重要依據(jù)；在臨床研究中，非臨床藥代動力學(xué)研究結(jié)果能為設(shè)計和優(yōu)化臨床研究給藥方案提供有關(guān)參考信息。

本指導(dǎo)原則是供藥物研究開發(fā)機構(gòu)進行化學(xué)藥品新藥的非臨床藥代動力學(xué)研究的參考，而不是新藥申報的條框要求。研究者可根據(jù)不同藥物的特點，參考本指導(dǎo)原則，科學(xué)合理地進行試驗設(shè)計，并對試驗結(jié)果進行綜合評價。

本指導(dǎo)原則的主要內(nèi)容包括進行非臨床藥代動力學(xué)研究的基本原則、試驗設(shè)計的總體要求、生物樣品的藥物分析方法、研究項目（血藥濃度-時間曲線、吸收、分布、排泄、血漿蛋白結(jié)合、生物轉(zhuǎn)化、對藥物代謝酶活性的影響）、數(shù)據(jù)處理與分析、結(jié)果與評價等，并對研究中的一些常見問題及處理思路進行了分析。

二、基本原則

進行非臨床藥代動力學(xué)研究，要遵循以下基本原則：

（一）試驗?zāi)康拿鞔_

（二）試驗設(shè)計合理

（三）分析方法可靠

（四）所得參數(shù)全面，滿足評價要求

（五）對試驗結(jié)果進行綜合分析與評價

（六）具體問題具體分析

三、試驗設(shè)計

（一）總體要求

1、受試物

應(yīng)提供受試物的名稱、劑型、批號、來源、純度、保存條件及配制方法。使用的受試物及劑型應(yīng)盡量與藥效學(xué)或毒理學(xué)研究的一致，并附研制單位的質(zhì)檢報告。

2、試驗動物

一般采用成年和健康的動物。常用動物有小鼠、大鼠、兔、豚鼠、犬、小型豬和猴等。動物選擇的一般原則如下:

2.1 首選動物：盡可能與藥效學(xué)和毒理學(xué)研究一致。

2.2 盡量在清醒狀態(tài)下試驗，動力學(xué)研究最好從同一動物多次采樣。

2.3 創(chuàng)新性的藥物應(yīng)選用兩種或兩種以上的動物，其中一種為嚙齒類動物；另一種為非嚙齒類動物（如犬、小型豬或猴等）。其他藥物，可選用一種動物，建議首選非嚙齒類動物。

2.4 經(jīng)口給藥不宜選用兔等食草類動物。

3、劑量選擇

動物體內(nèi)藥代動力學(xué)研究應(yīng)設(shè)置至少三個劑量組，其高劑量最好接近最大耐受劑量，中、小劑量根據(jù)動物有效劑量的上下限范圍選取。主要考察在所試劑量范圍內(nèi)，藥物的體內(nèi)動力學(xué)過程是屬于線性還是非線性，以利于解釋藥效學(xué)和毒理學(xué)研究中的發(fā)現(xiàn)，并為新藥的進一步開發(fā)和研究提供信息。

4、給藥途徑

所用的給藥途徑和方式，應(yīng)盡可能與臨床用藥一致。

（二）生物樣品的藥物分析方法

生物樣品的藥物分析方法包括色譜法、放射性核素標記法、免疫學(xué)和微生物學(xué)方法。應(yīng)根據(jù)受試物的性質(zhì)，選擇特異性好、靈敏度高的測定方法。色譜法包括高效液相色譜法（HPLC）、氣相色譜法（GC）和色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（如LC-MS，LC-MS/MS，GC-MS，GC-MS/MS方法）。在需要同時測定生物樣品中多種化合物的情況下，LC-MS/MS和GC-MS/MS聯(lián)用法在特異性、靈敏度和分析速度方面有更多的優(yōu)點。

對于前體藥物或有活性（藥效學(xué)或毒理學(xué)活性）代謝產(chǎn)物的藥物，建立方法時應(yīng)考慮能同時測定原形藥和代謝物，以考察物質(zhì)平衡（Mass Balance），闡明藥物在體內(nèi)的轉(zhuǎn)歸。在這方面，放射性核素標記法和色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法具有明顯優(yōu)點。

應(yīng)用放射性核素標記法測定血藥濃度可配合色譜法，以保證良好的檢測特異性。如某些藥物難以用上述的檢測方法，可選用免疫學(xué)或生物學(xué)方法，但要保證其可靠性。

放射免疫法和酶標免疫法具有一定特異性，靈敏度高，但原形藥與其代謝產(chǎn)物或內(nèi)源性物質(zhì)常有交叉反應(yīng)，需提供證據(jù)說明其特異性。

生物學(xué)方法（如微生物法）常能反映藥效學(xué)本質(zhì)，但一般特異性較差，應(yīng)盡可能用特異性高的方法（如色譜法）進行平行檢查。

生物樣品測定的關(guān)鍵是方法學(xué)的確證（Validation）。方法學(xué)確證是整個藥代動力學(xué)研究的基礎(chǔ)。所有藥代動力學(xué)研究結(jié)果，都依賴于生物樣品的測定，只有可靠的方法才能得出可靠的結(jié)果。通過準確度、精密度、特異性、靈敏度、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性等研究建立了測定方法，得到了標準曲線后，在檢測過程中還應(yīng)進行方法學(xué)質(zhì)控，制備隨行標準曲線并對質(zhì)控樣品進行測定，以確保檢測方法的可靠性。

本指導(dǎo)原則提供了生物樣品分析方法的基本要求（見附錄），研究時可根據(jù)藥物特點及分析方法的具體類型進行選擇。

（三）研究項目

1、血藥濃度-時間曲線

1.1 受試動物數(shù)：以血藥濃度-時間曲線的每個采樣點不少于5個數(shù)據(jù)為限計算所需動物數(shù)。最好從同一動物個體多次取樣。如由多只動物的數(shù)據(jù)共同構(gòu)成一條血藥濃度-時間曲線，應(yīng)相應(yīng)增加動物數(shù)，以反映個體差異對試驗結(jié)果的影響。建議受試動物采用雌雄各半，如發(fā)現(xiàn)動力學(xué)存在明顯的性別差異，應(yīng)增加動物數(shù)以便認識受試物的藥代動力學(xué)的性別差異。對于單一性別用藥，可選擇與臨床用藥一致的性別。

1.2 采樣點：采樣點的確定對藥代動力學(xué)研究結(jié)果有重大影響，若采樣點過少或選擇不當，得到的血藥濃度-時間曲線可能與藥物在體內(nèi)的真實情況產(chǎn)生較大差異。給藥前需要采血作為空白樣品。為獲得給藥后的一個完整的血藥濃度-時間曲線，采樣時間點的設(shè)計應(yīng)兼顧藥物的吸收相、平衡相（峰濃度附近）和消除相。一般在吸收相至少需要2~3個采樣點，對于吸收快的血管外給藥的藥物，應(yīng)盡量避免第一個點是峰濃度（Cmax）；在Cmax附近至少需要3個采樣點；消除相需要4~6個采樣點。整個采樣時間至少應(yīng)持續(xù)到3~5個半衰期，或持續(xù)到血藥濃度為Cmax的1/10~1/20。為保證最佳采樣點，建議在正式試驗前，選擇2~3只動物進行預(yù)試驗，然后根據(jù)預(yù)試驗的結(jié)果，審核并修正原設(shè)計的采樣點。

1.3 口服給藥：一般在給藥前應(yīng)禁食12小時以上，以排除食物對藥物吸收的影響。另外在試驗中應(yīng)注意根據(jù)具體情況統(tǒng)一給藥后禁食時間，以避免由此帶來的數(shù)據(jù)波動及食物的影響。

1.4 藥代動力學(xué)參數(shù)：根據(jù)試驗中測得的各受試動物的血藥濃度-時間數(shù)據(jù)，求得受試物的主要藥代動力學(xué)參數(shù)。靜脈注射給藥，應(yīng)提供t_1/2（消除半衰期）、Vd（表觀分布容積）、AUC（血藥濃度-時間曲線下面積）、CL（清除率）等參數(shù)值；血管外給藥， 除提供上述參數(shù)外, 尚應(yīng)提供Cmax和Tmax（達峰時間）等參數(shù)，以反映藥物吸收的規(guī)律。另外，提供統(tǒng)計矩參數(shù)，如: MRT（平均滯留時間）、AUC_(0-t)和AUC_(0-∞)等，對于描述藥物藥代動力學(xué)特征也是有意義的。

1.5 應(yīng)提供的數(shù)據(jù)

1.5.1 單次給藥

各個（和各組）受試動物的血藥濃度-時間數(shù)據(jù)及曲線和其平均值、標準差及曲線。

各個（和各組）受試動物的主要藥代動力學(xué)參數(shù)及平均值、標準差。

對受試物單次給藥非臨床藥代動力學(xué)的規(guī)律和特點進行討論和評價。

1.5.2 多次給藥

各個（和各組）受試動物首次給藥后的血藥濃度-時間數(shù)據(jù)及曲線和主要藥代動力學(xué)參數(shù)。

各個（和各組）受試動物的3次穩(wěn)態(tài)谷濃度數(shù)據(jù)及平均值、標準差。

各個（和各組）受試動物血藥濃度達穩(wěn)態(tài)后末次給藥的血藥濃度-時間數(shù)據(jù)和曲線，及其平均值、標準差和曲線。

比較首次與末次給藥的血藥濃度-時間曲線和有關(guān)參數(shù)。

各個（和各組） 平均穩(wěn)態(tài)血藥濃度及標準差。

2、吸收

對于經(jīng)口給藥的新藥，應(yīng)進行整體動物試驗，盡可能同時進行血管內(nèi)給藥的試驗，提供絕對生物利用度。如有必要，可進行在體或離體腸道吸收試驗以闡述藥物吸收特性。

對于其他血管外給藥的藥物及某些改變劑型的藥物，應(yīng)根據(jù)立題目的，盡可能提供絕對生物利用度。

3、分布

選用大鼠或小鼠做組織分布試驗較為方便。選擇一個劑量（一般以有效劑量為宜）給藥后，至少測定藥物在心、肝、脾、肺、腎、胃腸道、生殖腺、腦、體脂、骨骼肌等組織的濃度，以了解藥物在體內(nèi)的主要分布組織。特別注意藥物濃度高、蓄積時間長的組織和器官，以及在藥效或毒性靶器官的分布（如對造血系統(tǒng)有影響的藥物，應(yīng)考察在骨髓的分布）。參考血藥濃度-時間曲線的變化趨勢，選擇至少3個時間點分別代表吸收相、平衡相和消除相的藥物分布。若某組織的藥物濃度較高，應(yīng)增加觀測點，進一步研究該組織中藥物消除的情況。每個時間點，至少應(yīng)有5個動物的數(shù)據(jù)。

進行組織分布試驗，必須注意取樣的代表性和一致性。

同位素標記物的組織分布試驗，應(yīng)提供標記藥物的放化純度、標記率（比活性）、標記位置、給藥劑量等參數(shù)；提供放射性測定所采用的詳細方法，如分析儀器、本底計數(shù)、計數(shù)效率、校正因子、樣品制備過程等；提供采用放射性示蹤生物學(xué)試驗的詳細過程，以及在生物樣品測定時對放射性衰變所進行的校正方程等。盡可能提供給藥后不同時相的整體放射自顯影圖像。

4、排泄

4.1 尿和糞的藥物排泄：一般采用小鼠或大鼠，將動物放入代謝籠內(nèi)，選定一個有效劑量給藥后，按一定的時間間隔分段收集尿或糞的全部樣品，測定藥物濃度。糞樣品涼干后稱重（不同動物糞便干濕不同），按一定比例制成勻漿，記錄總體積，取部分樣品進行藥物含量測定。計算藥物經(jīng)此途徑排泄的速率及排泄量，直至收集到的樣品測定不到藥物為止。每個時間點至少有5只動物的試驗數(shù)據(jù)。

應(yīng)采取給藥前尿及糞樣，并參考預(yù)試驗的結(jié)果，設(shè)計給藥后收集樣品的時間點，包括藥物從尿或糞中開始排泄、排泄高峰及排泄基本結(jié)束的全過程。

4.2 膽汁排泄：一般用大鼠在乙醚麻醉下作膽管插管引流，待動物清醒后給藥，并以合適的時間間隔分段收集膽汁，進行藥物測定。

4.3 記錄藥物自糞、尿、膽汁排出的速度及總排出量（占總給藥量的百分比），提供物質(zhì)平衡的數(shù)據(jù)。

5、與血漿蛋白的結(jié)合

研究藥物與血漿蛋白結(jié)合試驗可采用多種方法，如平衡透析法、超過濾法、分配平衡法、凝膠過濾法、光譜法等。根據(jù)藥物的理化性質(zhì)及試驗室條件，可選擇使用一種方法進行至少3個濃度（包括有效濃度）的血漿蛋白結(jié)合試驗，每個濃度至少重復(fù)試驗三次，以了解藥物的血漿蛋白結(jié)合率是否有濃度依賴性。

一般情況下，只有游離型藥物才能通過脂膜向組織擴散，被腎小管濾過或被肝臟代謝，因此藥物與蛋白的結(jié)合會明顯影響藥物分布與消除的動力學(xué)過程，并降低藥物在靶部位的作用強度。建議根據(jù)藥理毒理研究所采用的動物種屬，進行動物與人血漿蛋白結(jié)合率比較試驗，以預(yù)測和解釋動物與人在藥效和毒性反應(yīng)方面的相關(guān)性。

對蛋白結(jié)合率高于90%以上的藥物，建議開展體外藥物競爭結(jié)合試驗，即選擇臨床上有可能合并使用的高蛋白結(jié)合率藥物，考察對所研究藥物蛋白結(jié)合率的影響。

6、生物轉(zhuǎn)化

對于創(chuàng)新性的藥物，尚需了解在體內(nèi)的生物轉(zhuǎn)化情況，包括轉(zhuǎn)化類型、主要轉(zhuǎn)化途徑及其可能涉及的代謝酶。對于新的前體藥物, 除對其代謝途徑和主要活性代謝物結(jié)構(gòu)進行研究外, 尚應(yīng)對原形藥和活性代謝物進行系統(tǒng)的藥代動力學(xué)研究。而對主要在體內(nèi)以代謝消除為主的藥物(原形藥排泄<50%)，生物轉(zhuǎn)化研究則可分為兩個階段：臨床前可先采用色譜方法或放射性核素標記方法分析和分離可能存在的代謝產(chǎn)物，并用色譜-質(zhì)譜聯(lián)用等方法初步推測其結(jié)構(gòu)。如果II期臨床研究提示其在有效性和安全性方面有開發(fā)前景，在申報生產(chǎn)前進一步研究并闡明主要代謝產(chǎn)物的可能代謝途徑、結(jié)構(gòu)及代謝酶。但當多種跡象提示可能存在有較強活性的代謝產(chǎn)物時，應(yīng)盡早開展活性代謝產(chǎn)物的研究，以確定開展代謝產(chǎn)物動力學(xué)試驗的必要性。

7、對藥物代謝酶活性的影響

對于創(chuàng)新性的藥物，應(yīng)觀察藥物對藥物代謝酶，特別是細胞色素P450同工酶的誘導(dǎo)或抑制作用。在臨床前階段可以用底物法觀察對動物和人肝微粒體P450酶的抑制作用，比較種屬差異。藥物對酶的誘導(dǎo)作用可觀察整體動物多次給藥后的肝P450酶或在藥物反復(fù)作用后的肝細胞（最好是人肝細胞）P450酶活性的變化，以了解該藥物是否存在潛在的代謝性相互作用。

四、數(shù)據(jù)處理與分析

應(yīng)有效整合各項試驗數(shù)據(jù)，選擇科學(xué)合理的數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計方法。如用計算機處理數(shù)據(jù)，應(yīng)注明所用程序的名稱、版本和來源，并對其可靠性進行確認。

五、結(jié)果與評價

對所獲取的數(shù)據(jù)應(yīng)進行科學(xué)和全面的分析與評價，綜合論述藥物在動物體內(nèi)的藥代動力學(xué)特點，包括藥物吸收、分布和消除的特點；經(jīng)尿、糞和膽汁的排泄情況；與血漿蛋白結(jié)合的程度；藥物在體內(nèi)蓄積的程度及主要蓄積的器官或組織；如為創(chuàng)新性的藥物，還應(yīng)闡明其在體內(nèi)的生物轉(zhuǎn)化、消除過程及物質(zhì)平衡情況。

在評價的過程中注意進行綜合評價，分析藥代動力學(xué)特點與藥物的制劑選擇、有效性和安全性的關(guān)系，為藥物的整體評價和臨床研究提供更多有價值的信息。

六、常見問題與處理思路

（一）藥代動力學(xué)與制劑研究

藥代動力學(xué)主要研究藥物在體內(nèi)的動態(tài)過程。藥物的理化性質(zhì)與上述過程密切相關(guān)，同時劑型特征、制劑所使用的輔料、制備工藝等也是重要的影響因素。因此在進行制劑研究時，可結(jié)合藥代動力學(xué)研究結(jié)果，利用或避開藥物的某些性質(zhì)。

一般來說影響吸收過程的因素包括藥物的物理化學(xué)性質(zhì)和/或制劑因素、生理因素等。藥物的理化性質(zhì)包括溶解度、油水分配系數(shù)、酸堿度、粒度、晶型、滲透性以及藥物在胃腸道中的穩(wěn)定性等，制劑因素包括劑型、輔料和制備工藝以及不同劑型制劑的給藥途徑等。

新的給藥系統(tǒng)在不斷發(fā)展，如脂質(zhì)體、納米給藥系統(tǒng)、透皮給藥系統(tǒng)、局部定位給藥系統(tǒng)、脈沖給藥系統(tǒng)等。研究者可根據(jù)不同的用藥需要，結(jié)合藥物及其制劑的特點，制訂合理、可行的藥代動力學(xué)研究方案。

（二）關(guān)于多次給藥

對于臨床需長期給藥且有蓄積傾向的藥物，應(yīng)考慮進行多次給藥的藥代動力學(xué)研究。

多次給藥試驗時, 一般可選用一個劑量(有效劑量)。 根據(jù)單次給藥藥代動力學(xué)試驗結(jié)果求得的消除半衰期，并參考藥效學(xué)數(shù)據(jù), 確定藥物劑量、給藥間隔和給藥天數(shù)。

以下情況可考慮進行多次給藥后特定組織的藥物濃度研究：

1、藥物/代謝物在組織中的半衰期明顯超過其血漿消除半衰期，并超過毒性研究給藥間隔的兩倍；

2、在短期毒性研究、單次給藥的組織分布研究或其他藥理學(xué)研究中觀察到未預(yù)料的，而且對安全性評價有重要意義的組織病理學(xué)改變；

3、定位靶向釋放的藥物。

（三）關(guān)于體外藥代動力學(xué)研究

隨著新藥研究水平的不斷提高，一些新的體外藥代動力學(xué)研究手段也逐漸成熟，如體外吸收模型（Caco-2細胞模型）、體外肝系統(tǒng)研究等。在進行藥代動力學(xué)研究時，除了體內(nèi)研究外，還可配合體外研究，如觀察動物和人肝等組織勻漿、細胞懸液、微粒體或灌流器官對藥物的代謝作用。采用體外方法研究代謝途徑和動力學(xué)特點比較方便，節(jié)省動物，可以獲得更多的信息，例如分析代謝模式、代謝酶對藥物作用的動力學(xué)參數(shù)、藥物及其代謝物與蛋白、DNA等靶分子的親和力等。這些信息對于補充說明體內(nèi)的研究結(jié)果，進一步闡明藥理和毒理作用機制是有價值的。

（四）關(guān)于動物選擇

由于動物藥代動力學(xué)研究是聯(lián)系動物研究與人體研究的重要橋梁，動物選擇的恰當與否是該研究價值大小的關(guān)鍵。應(yīng)盡量選擇適宜的動物來進行研究，如口服給藥的藥物不宜選擇食草類動物或與人胃腸道情況差異較大的動物，以免由于吸收的差異造成試驗結(jié)果不能充分提示臨床。對于創(chuàng)新性的藥物，可利用體外藥代動力學(xué)手段預(yù)先對動物種屬進行篩選，以選擇藥物動力學(xué)特點與人體最接近的動物，提高試驗結(jié)果的臨床預(yù)測價值。由此也可為毒性試驗選擇合適的動物種屬提供依據(jù)，并對毒性試驗與人體的相關(guān)性做出判斷。

（五）關(guān)于改變酸根、晶型的藥物

對于改變酸根、晶型的藥物，應(yīng)根據(jù)藥物的特點、改變的具體情況和立題依據(jù)，考慮是否應(yīng)進行與改變前藥物比較的藥代動力學(xué)研究，考察其生物利用度的變化。

（六）關(guān)于手性藥物

對映異構(gòu)體具有幾乎相同的物理性質(zhì)（旋光性除外）和化學(xué)性質(zhì)（在手性環(huán)境中除外），通常需要特殊的手性技術(shù)對它們進行鑒定、表征、分離和測定，但生物系統(tǒng)常常很容易區(qū)分它們，并可能導(dǎo)致不同的藥代動力學(xué)性質(zhì)（吸收、分布、代謝、排泄），以及藥理學(xué)、毒理學(xué)效應(yīng)的量或質(zhì)的區(qū)別。

為評價單一對映體或?qū)τ丑w混合物的藥代動力學(xué)，研究者應(yīng)在藥物開發(fā)前期，建立適用于體內(nèi)樣品對映體選擇性分析的定量方法，為后期研究對映體之間的相互轉(zhuǎn)化以及各自的吸收、分布、代謝和排泄提供方法學(xué)基礎(chǔ)。

如果外消旋體已經(jīng)上市，研究者希望開發(fā)單一對映體，則應(yīng)測定該對映體轉(zhuǎn)化為另一對映體的程度是否顯著，以及該對映體單獨用藥是否與其作為外消旋體組分時的藥代動力學(xué)性質(zhì)一致。

為監(jiān)測對映異構(gòu)體在體內(nèi)的相互轉(zhuǎn)化和處置，應(yīng)獲得單一對映體在動物體內(nèi)的藥代動力學(xué)曲線，并與其后在臨床I期試驗中獲得的藥代動力學(xué)曲線相比較。

（七）關(guān)于復(fù)方藥物

對于新的復(fù)方制劑，應(yīng)通過復(fù)方與單藥藥代動力學(xué)的比較，研究其相互作用，以考察組方的合理性。

（八）藥代動力學(xué)與毒代動力學(xué)

毒代動力學(xué)研究通常結(jié)合毒性研究進行，將獲得的藥代動力學(xué)資料作為毒性研究的組成部分，以評價全身暴露的結(jié)果。藥代動力學(xué)和毒代動力學(xué)研究的目的不同，但兩者又是相互聯(lián)系的，其分析方法是相同的，技術(shù)可以共享或相互借鑒。已獲取的藥代動力學(xué)參數(shù)可以為毒代和毒性試驗給藥方案的設(shè)計提供參考。三個劑量的藥代動力學(xué)試驗中，最高劑量采用接近動物最大耐受量所得到的動力學(xué)參數(shù)，對毒代動力學(xué)試驗設(shè)計有直接的參考價值。藥物組織分布研究結(jié)果可為評價藥物毒性靶器官提供依據(jù)。藥物與血漿蛋白結(jié)合試驗的結(jié)果也是估算血藥濃度與毒性反應(yīng)關(guān)系的依據(jù)，因為毒性反應(yīng)與血中游離藥物-時間曲線下面積的相關(guān)性優(yōu)于總的藥-時曲線下面積。生物轉(zhuǎn)化研究所提供的代謝產(chǎn)物資料有助于判斷可能引起毒性反應(yīng)的成分和毒代動力學(xué)研究應(yīng)檢測的成分。

毒代動力學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則將另行制訂。

（九）關(guān)于緩控釋制劑

緩控釋制劑的藥代動力學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則將另行制訂。

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10、USP 25. 2002

八、附錄

生物樣品分析方法的基本要求

1、基本概念

生物樣品分析方法的基本參數(shù)包括：（1）準確度，（2）精密度，（3）特異性，（4）靈敏度，（5）重現(xiàn)性，（6）穩(wěn)定性?，F(xiàn)將相關(guān)的概念介紹如下：

準確度：在確定的分析條件下，測得值與真實值的接近程度。

精密度：在確定的分析條件下，相同介質(zhì)中相同濃度樣品的一系列測量值的分散程度。

特異性：分析方法測量和區(qū)分共存組分中分析物的能力。這些共存組分可能包括代謝物、雜質(zhì)、分解產(chǎn)物、介質(zhì)組分等。

靈敏度：生物樣品分析方法的靈敏度通過標準曲線來表征，主要包括定量下限和濃度-響應(yīng)函數(shù)。

重現(xiàn)性：不同試驗室間測定結(jié)果的分散程度，以及相同條件下分析方法在間隔一段短時間后測定結(jié)果的分散程度。

穩(wěn)定性：一種分析物在確定條件下，一定時間內(nèi)在給定介質(zhì)中的化學(xué)穩(wěn)定性。

標準曲線：試驗響應(yīng)值與分析物濃度間的關(guān)系。應(yīng)采用適當?shù)募訖?quán)和統(tǒng)計檢驗，用簡單的數(shù)學(xué)模型來最適當?shù)孛枋?。標準曲線應(yīng)是連續(xù)的和可重現(xiàn)的，應(yīng)以回歸計算結(jié)果的百分偏差最小為基礎(chǔ)。

提取回收率：分析過程的提取效率，以樣品提取和處理過程前后分析物含量百分比表示。

定量范圍：包括定量上限（ULOQ）和定量下限（LLOQ）的濃度范圍，在此范圍內(nèi)采用濃度-響應(yīng)關(guān)系能進行可靠的、可重復(fù)的定量，其準確度和精密度可以接受。

生物介質(zhì)：一種生物來源物質(zhì)，能夠以可重復(fù)的方式采集和處理。例如全血、血漿、血清、尿、糞、各種組織等。

介質(zhì)效應(yīng)：由于樣品中存在干擾物質(zhì)，對響應(yīng)造成的直接或間接的影響。

分析批：包括待測樣品、適當數(shù)目的標準樣品和質(zhì)控樣品的完整系列。一天內(nèi)可以完成幾個分析批，一個分析批也可以持續(xù)幾天完成。

標準樣品：在生物介質(zhì)中加入已知量分析物配制的樣品，用于建立標準曲線，計算質(zhì)控樣品和未知樣品中分析物濃度。

質(zhì)控樣品：即QC樣品，系指在生物介質(zhì)中加入已知量分析物配制的樣品，用于監(jiān)測生物分析方法的重復(fù)性和評價每一分析批中未知樣品分析結(jié)果的完整性和正確性。

2、生物樣品分析方法的建立和確證

由于生物樣品取樣量少、藥物濃度低、內(nèi)源性物質(zhì)（如無機鹽、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、代謝物）及個體差異等多種因素影響生物樣品測定，所以必須根據(jù)待測物的結(jié)構(gòu)、生物介質(zhì)和預(yù)期的濃度范圍，建立適宜的生物樣品分析方法，并對方法進行確證。

分析方法確證分為全面確證和部分確證兩種情況。對于首次建立的生物樣品分析方法、新的藥物或新增代謝物定量分析，應(yīng)進行全面方法確證。在其他情況下可以考慮進行部分方法確證，如生物樣品分析方法在試驗室間的轉(zhuǎn)移、定量濃度范圍改變、生物介質(zhì)改變、稀少生物介質(zhì)、證實復(fù)方給藥后分析方法的特異性等。

應(yīng)考察方法的每一步驟，確定從樣品采集到分析測試的全過程中，環(huán)境、介質(zhì)、材料或操作上的可能改變對測定結(jié)果的影響。

（1）特異性

必須證明所測定的物質(zhì)是預(yù)期的分析物，內(nèi)源性物質(zhì)和其他代謝物不得干擾樣品的測定。對于色譜法至少要考察6個不同個體空白生物樣品色譜圖、空白生物樣品外加對照物質(zhì)色譜圖（注明濃度）及用藥后的生物樣品色譜圖。對于以軟電離質(zhì)譜為基礎(chǔ)的檢測方法（LC-MS、LC-MS/MS等），應(yīng)注意考察分析過程中的介質(zhì)效應(yīng)，如離子抑制等。

（2）標準曲線與定量范圍

根據(jù)所測定物質(zhì)的濃度與響應(yīng)的相關(guān)性，用回歸分析方法（如用加權(quán)最小二乘法）獲得標準曲線。標準曲線高低濃度范圍為定量范圍，在定量范圍內(nèi)濃度測定結(jié)果應(yīng)達到試驗要求的精密度和準確度。

用至少5個濃度建立標準曲線，應(yīng)使用與待測樣品相同的生物介質(zhì)，定量范圍要能覆蓋全部待測濃度，不允許將定量范圍外推求算未知樣品的濃度。建立標準曲線時應(yīng)隨行空白生物樣品，但計算時不包括該點。

（3） 精密度與準確度

要求選擇3個濃度的質(zhì)控樣品同時進行方法的精密度和準確度考察。低濃度選擇在定量下限附近，其濃度在定量下限的3倍以內(nèi)；高濃度接近于標準曲線的上限；中間選一個濃度。每一濃度每批至少測定5個樣品，為獲得批間精密度，應(yīng)至少連續(xù)3個分析批合格。

精密度用質(zhì)控樣品的批內(nèi)和批間相對標準差（RSD）表示，相對標準差一般應(yīng)小于15%，在定量下限附近相對標準差應(yīng)小于20%。

準確度一般應(yīng)在85%～115%范圍內(nèi)，在定量下限附近應(yīng)在80%～120%范圍內(nèi)。

（4） 定量下限

定量下限是標準曲線上的最低濃度點，要求至少能滿足測定3～5個半衰期時樣品中的藥物濃度，或C_max的1/10～1/20時的藥物濃度，其準確度應(yīng)在真實濃度的80%～120%范圍內(nèi)，RSD應(yīng)小于20%。應(yīng)由至少5個標準樣品測試結(jié)果證明。

（5） 樣品穩(wěn)定性

根據(jù)具體情況，對含藥生物樣品在室溫、冰凍或凍融條件下以及不同存放時間進行穩(wěn)定性考察，以確定生物樣品的存放條件和時間。還應(yīng)注意儲備液的穩(wěn)定性以及樣品處理后的溶液中分析物的穩(wěn)定性。

（6） 提取回收率

應(yīng)考察高、中、低3個濃度的提取回收率，其結(jié)果應(yīng)精密和可重現(xiàn)。

（7） 微生物學(xué)和免疫學(xué)分析

上述分析方法確證的很多參數(shù)和原則也適用于微生物學(xué)或免疫學(xué)分析，但在方法確證中應(yīng)考慮到它們的一些特殊之處。微生物學(xué)或免疫學(xué)分析的標準曲線本質(zhì)上是非線性的，所以盡可能采用比化學(xué)分析更多的濃度點來建立標準曲線。結(jié)果的準確度是關(guān)鍵的因素，如果重復(fù)測定能夠改善準確度，則應(yīng)在方法確證和未知樣品測定中采用同樣的步驟。

3、生物樣品分析方法的應(yīng)用

應(yīng)在生物樣品分析方法確證完成之后開始測試未知樣品。推薦由獨立的人員配制不同濃度的標準樣品對分析方法進行考核。

每個未知樣品一般測定一次，必要時可進行復(fù)測。藥代動力學(xué)比較試驗中，來自同一個體的生物樣品最好在同一分析批中測定。

每個分析批應(yīng)建立標準曲線（組織分布試驗時，可視具體情況而定），隨行測定高、中、低3個濃度的質(zhì)控樣品，每個濃度至少雙樣本，并應(yīng)均勻分布在未知樣品測試順序中。當一個分析批中未知樣品數(shù)目較多時，應(yīng)增加各濃度質(zhì)控樣品數(shù)，使質(zhì)控樣品數(shù)大于未知樣品總數(shù)的5%。質(zhì)控樣品測定結(jié)果的偏差一般應(yīng)小于15%，低濃度點偏差一般應(yīng)小于20%，最多允許1/3質(zhì)控樣品的結(jié)果超限，但不能在同一濃度中出現(xiàn)。如質(zhì)控樣品測定結(jié)果不符合上述要求，則該分析批樣品測試結(jié)果作廢。

濃度高于定量上限的樣品，應(yīng)采用相應(yīng)的空白介質(zhì)稀釋后重新測定。對于濃度低于定量下限的樣品，在進行藥代動力學(xué)分析時，在達到Cmax以前取樣的樣品應(yīng)以零值計算，在達到Cmax以后取樣的樣品應(yīng)以無法定量（Not detectable, ND）計算，以減小零值對AUC計算的影響。

4、分析數(shù)據(jù)的記錄與保存

分析方法的有效性應(yīng)通過試驗證明。在分析報告中，應(yīng)提供成功完成這些試驗工作的相關(guān)資料。建立一般性和特殊性標準操作規(guī)程，保存完整的試驗記錄是分析方法有效性的基本要素。生物分析方法建立中產(chǎn)生的數(shù)據(jù)和QC樣品測試結(jié)果應(yīng)全部記錄并妥善保存，必要時接受檢查。

提供給藥品注冊管理部門的材料應(yīng)當包括：（1）綜合信息；（2）方法建立的數(shù)據(jù)；（3）在日常樣品分析中的基本資料；（4）其他相關(guān)信息。

（1）綜合信息

項目編號，分析方法編號，分析方法類型，分析方法確證簡化的理由，以及相應(yīng)的項目計劃編號、標題等。

（2）方法建立的數(shù)據(jù)

分析方法的詳細描述；該方法所用對照品（被測藥物、代謝物、內(nèi)標物）的純度和來源；穩(wěn)定性試驗描述及相關(guān)數(shù)據(jù)；描述測定選擇性、準確度、精密度、回收率、定量限、標準曲線的試驗并給出獲得的主要數(shù)據(jù)；列出批內(nèi)、批間精密度和準確度的詳細結(jié)果。根據(jù)具體情況提供代表性的色譜圖或質(zhì)譜圖并加以說明。此外，尚需對所建立的方法學(xué)在實際分析過程中的優(yōu)缺點進行評價。

（3）在日常樣品分析中的基本資料

所用樣品（受試物、代謝物、內(nèi)標物）的純度和來源。樣品處理和保存的情況，樣品編號、采集日期、運輸前的保存、運輸情況、分析前的保存。信息應(yīng)包括日期、時間、樣品所處條件，以及任何偏離試驗計劃的情況。樣品分析批的綜合信息，包括分析批編號、分析日期、分析方法、分析人員、開始和結(jié)束時間、主要設(shè)備和材料的變化，以及任何可能偏離分析方法建立時的情況。

用于計算結(jié)果的回歸方程，分析樣品時標準曲線列表，各分析批質(zhì)控樣品測定結(jié)果綜合列表并計算批內(nèi)和批間精密度、準確度，各分析批包括的未知樣品，濃度計算結(jié)果。

提供20%受試物樣品測試的色譜圖或其他原始數(shù)據(jù)的復(fù)印件，包括相應(yīng)分析批的標準曲線和質(zhì)控樣品的色譜圖或其他原始數(shù)據(jù)的復(fù)印件。

注明缺失樣品的原因，重復(fù)測試的結(jié)果。應(yīng)對舍棄任何分析數(shù)據(jù)和選擇所報告的數(shù)據(jù)說明理由。

（4）其他相關(guān)信息

縮略語列表，參考文獻列表，標準操作規(guī)程列表。

九、著者

《化學(xué)藥物非臨床藥代動力學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則》課題研究組